الجمعة، 7 أكتوبر، 2011

تحضير المواد والصبغات الكيميائية الخاصة بتجارب علم وظائف أعضاء النبات ( فسيولوجيا النبات )


تحضير المواد اللازمة في تجارب فسيولوجيا النبات
تحضير الأملاح حسب التركيز المئوي
يؤخذ من الملح المراد تحضيره بالتركيز المئوي س جرام وتذاب الكمية في 100 ملل ماء مقطر فيصبح التركيز س% .
مثال : عند تحضير محلول كلوريد الصوديوم بتركيز 2%
        نأخذ 2 جم من الملح ويذاب في 100 ملل ماء مقطر .
        وهكذا بالنسبة لبقية الأملاح .

1-  تحضير المواد السائلة مثل الأحماض بالتركيز المئوي
يؤخذ من الحمض المراد تحضيره بالتركيز المئوي س ملل وتضاف إلى 100 ملل من الماء المقطر فيصبح التركيز س% .
مثال : عند تحضير محلول حمض الهيدروكلوريك بتركيز 1%
    نأخذ 1 ملل من الحمض ويضاف إلى 100 ملل من ماء مقطر .
    وهكذا بالنسبة لبقية المواد السائلة .

2-  تحضير المواد الصلبة والسائلة بالتركيز الوزني الجزيئي
يحسب الوزن الجزيئي للمركب ثم يضاف إلى لتر من الماء المقطر
مثال : عند تحضير 1 جزيئي وزني من حمض الهيدروكلوريك ( الوزن الجزيئي له 36.45 ) فيضاف 36.45 ملل من الحمض إلى لتر من الماء المقطر .
3-تحضير محلول بالعيارية فمثلاً حمض الهيدروكلوريك أحادي التكافؤ  فنذيب        36,45 جم /لتر بينما حمض الكبريتيك ثنائي التكافؤ ووزنه الجزيئي 98 فنحضر 1 عياري بإذابة 49 جم / لتر أما لتحضير 1 جزيئي منه فنذيب 98 / لتر ماء مقطر .
3-  صبغة أزرق الميثيلين
 مسحوق أزرق الميثيلين                        0.3 جرام
كحول إيثيلي 95%            30      ملل
ماء مقطر               100    ملل
أذب أزرق الميثيلين في الكحول ثم أضف الماء المقطر ورشح المحلول

4- صبغة السفرانين
مسحوق السفرانين            0.25  جرام
كحول إيثيلي 95%            10     ملل
ماء مقطر               100   ملل
أذب السفرانين في الكحول ثم أضف الماء المقطر ورشح .

5- صبغة أحمر الكونغو
مسحوق أحمر الكونغو       3  جم
ماء مقطر               100 ملل

6- صبغة اليود
يود                   1     جم
يوديد البوتاسيوم             2     جم
ماء مقطر               300 ملل
يذاب يوديد البوتاسيوم أولاً ثم يضاف اليود بعد ذلك ويرج المزيج حتى يذوب , ويمكن طحن اليود مع يوديد البوتاسيوم في هاون مع إضافة الماء بالتدريج .

7-صبغة حمض الفوكسين
* محلول أ
فوكسين قاعدي                     3    جم
إيثانول 95%                      10    ملل
* محلول ب
فينول                 5  جم
ماء مقطر               100 ملل
اخلط المحلولين أ و ب معاً مع أخذ الحذر.

8- كاشف الفينول فيثالين 0.25 %
يذاب 0.25 جم من مسحوق الفينول فيثالين مع كمية 20 ملل من الكحول الإيثيلي ثم يكمل المحلول إلى 100 ملل من الماء المقطر .
9 – محلول داي فينيل أمين
يذاب 2 جم من الفينيل أمين في 100 ملل من حمض الكبريتيك المركز .

فصل الصبغات النباتية بطريقةالفصل اللوني العمودي Separation of plant pigments by column chromatography


يحتوي النبات على عدة أنواع من الصبغات مثل الكلوروفيل أ و ب والزانثوفيل والكاروتين وقد تمكن العلماء من فصل الصبغات النباتية المختلفة باستخدام طرق الفصل الكروماتوجرافي ومن أفضل هذه الطرق الفصل اللوني العمودي .
وسنقوم هنا بفصل الصبغات النباتية بهذه الطريقة والتعرف عليها كيفياً من خلال اللون الناتج.

المواد والأدوات اللازمة :
10 جم من أوراق نباتية خضراء – كربونات الالسيوم – هاون – أسيتون 85 % - قمع فصل – إيثر إيثيلي – ماء مقطر – كبريتات الصوديوم اللامائية Anhydrous Na2SO4 .
خطوات العمل :
1-     10 جم من أوراق نباتية خضرء مع كمية قليلة من بلورات كربونات الكالسيوم ثم اهرسها في هاون لتكون عجينة ثم أضف 5 مل من أسيتون 85 % واستمر بالهرس .
2-     انقل السائل المتكون إلى قمع فصل سعة 250 مل وبه 10 مل من الإيثر الإيثيلي , كرر العملية السابقة عدة مرات .
3-     خذ الكمية التي حصلت عليها وضعها في هاون مرة أخرى وأضف كميات متساوية من الأسيتون المطلق والإيثر الإيثيلي ثم اهرسها جيداً .
4-     انقل السائل المتكون إلى قمع فصل به 5 مل من الأسيتون و 5 مل من الإيثر الإيثيلي وأضف إليه 100 مل من الماء المقطر على جوانب القمع وببطء لكي لا يتكون مستحلب ثم أدر القمع يمنة ويسرى دون الرج حتى يتكون طبقتين .
5-     تخلص من الطبقة السفلى بفتح صنبور قمع الفصل وكرر هذه العملية ثلاث مرات بترك السائل بضع دقائق للتتكون الطبقتين للتخلص من الأسيتون تماماً وللحفاظ على حجم الإيثر الإيثيلي ويمكن إضافة 5 – 10 مل من الإيثر الإيثيلي مع مراعاة أن يكون الحجم النهائي 15 مل .
6-     ضع المحلول النهائي في زجاجة وأضف كمية من كبريتات الصوديوم اللامائية للتخلص من بقايا الماء وعند ذلك يكون المستخلص جاهزاً للفصل .
7-     حضر أعمدة التحليل ( الفصل ) بسد الطرف الضيق بالقطن وضع كربونات الكالسيوم في العمود بطول 30 سم بحيث لا يكون بينها فراغات هوائية .ثم علق العمود على الحامل وأضف الإيثر الإيثيلي للعمود بالتدريج حتى يبتل العمود كلياً.
8-     أضف مستخلص النبات ببطء 2- 3 مل لكل عمود على شكل قطرات , وعندما ينزل المستخلص عن مستوى الكربونات نقوم بإضافة الإيثر الإيثيلي .
9-     تتبع فصل الصبغات والتي تتكون على شكل طبقات بحيث تكون السفلى ( التي لا تنزل مع المذيب ) تكون الكاروتينات ثم الزانثوفيل ثم كلوروفيل أ ثم كلوروفيل ب

فصل الأحماض الأمينية بواسطة الفصل اللوني الورقي ثنائي الأبعاد Separation of amino acids by tow dimentional paper chromatography


تعد الأحماض الأمينية وحدة البناء للبروتينات البنائية والوظيفية للنبات أو قد تدخل في تكوين بعض المركبات في النبات .
يمكن استخدام نفس الطريقة السابقة إلا أنه نظراً لإمكانية تداخل الأحماض الأمينية واحتمالية وجود عدد كبير منها سنتبع طريقة أخرى لهذه العملية وهي :

فصل الأحماض الأمينية بواسطة الفصل اللوني الورقي ثنائي الأبعاد

Separation of amino acids by tow dimentional paper chromatography
المواد والأدوات اللازمة :
20 جم بطاطس مقشر – مخلوط من الأحماض الأمينية ( ألانين , سيرسن , تيروسين ) بتركيز 1ملجرام مذاب في 0.5 عياري حمض الخل – 1 لتر من الإيثانول 80 % - 350 مل من المذيبين ( محلول الفينول المائي المشبع و n-Butanol : glacial acetic acid : water بنسبة ( 1 : 1 : 3 ) – محلول الإظهار ويحضر أثناء الدرس العملي لعدم ثباته      ( 0.1 جم ننهيدرين Ninhydrin في 100 مل من محلول n-Butanol المائي المشبع – أوراق فصل لوني – قمع بخنر – ماصات زجاجة رش – فرن تجفيف .

خطوات العمل :
1-  يحضر مستخلص الأحماض الأمينية بإضافة 100 مل من الإيثانول 80 % إلى 30 جم من البطاطس المقشرة ثم تهرس في هاون خزفي ثم ترشح بقمع بخنر بالتفريغ .
2-    انقل الراشح إلى طبق زجاجي وبخره عند درجة حرارة الغرفة وبالتفريغ إن أمكن أو في فرن التجفيف عند 45 ْم .
3-    خذ العينة الناتجة بعد التبخير وحضر منها محلول مائي بتركيز 30 ملجرام / مل ماء.
4-  ضع المذيب الأول في وعائين زجاجيين خاصين بالفصل والمذيب الثاني في وعائين آخرين    ( إثنين لخليط الأحماض الأمينية وإثنين للمستخلص ) بحيث يكون ارتفاع المذيب 3 سم من قاع أواني الفصل .
5-  ضع خط على بعد 5 سم من الحافة السفلى لورقة الفصل وعلم نقطة × ثم ضع قضيب زجاجي لرفع الورقة عن سطح الطاولة التي تعمل عليها وباستعمال ماصة دقيقة ضع نقطة من خليط الأحماض الأمينية وكرر هذه العملية عدة مرات على نفس النقطة ( حوالي 3 ميكروليتر ولاتزيد بقعة انتشار النقطة عن 1سم2 ) .
6-     كرر العملية السابقة على ورقة فصل أخرى مستعملاً هذه المرة المستخلص النباتي .
7-  ضع الورقتين في الوعائين المحتويين على المذيب الأول ( كل ورقة في وعاء منفصل ويمكن تشكيل ورقة الفصل على شكل اسطوانة إذا صعب تثبيتها على هيأتها) لمدة 12 ساعة تقريباً ثم علم المستوى الذي وصل إليه المذيب على ورقة الفصل بقلم رصاص .
8-  اترك الورقتين تجف تماماً . ستجد أن الأحماض الأمينية قد تراصت على هيئة صف على امتداد النقطة التي وضعتها .
9-  أدر الورقتين بحيث يكون صف الأحماض الأمينية للأسفل ثم ضعها في الوعائين المحتويين على المذيب الثاني ( كل ورقة في وعاء منفصل ) .
10-                     اترك الورقتين لمدة 12 ساعة تقريباً وبعد ذلك علم المستوى الذي وصل إليه المذيب بعد انتهاء الوقت .
11-       اترك الورقتين تجفان تماماً ثم قم برشها بالمحلول المظهر الننهيدرين رشاً خفيفاً شاملاً الورقة كاملة . ثم ضع الورقتين في فرن التجفيف لمدة 5 دقائق عند   90 ْم ثم علم البقع الناتجة بقلم الرصاص .
12-       نلاحظ أن الأحماض الأمينية تعطي ألواناً مختلفة بحسب نوعها , فاللون الأزرق دلالة على وجود phenylalanine , tyrosine , aspartic acid واللون البني الزيتوني دلالة على الحمض الأميني tryptophan واللون البني للأحماض aspargine , cystine واللون الأصفر proline .
13-       وبحساب Rf  لكل بقعة وبدلالة الألوان التي نحصل عليها يمكن معرفة نوعية الأحماض الأمينية الموجودة في أي مستخلص نباتي .

فصل بعض المركبات النباتية باستخدام الفصل اللوني الكروماتوجرافي Separation of some compounds by chromatography


تستخدم هذه الطريقة لفصل المركبات المختلفة الموجودة في النبات مثل الأحماض العضوية والأحماض الأمينية والسكريات والدهون والبروتينات والأصباغ النباتية الموجودة في النباتات لغرض الدراسات الفسيولوجية والكيميائية الحيوية .
ومن هذه الطرق اللونية الشائعة الفصل اللوني الورقي والفصل العمودي والغازي وغيرها . وتستخدم طريقة أو أكثر بغرض التقدير النوعي للمركبات أو فصل كل مركب عن الآخر بغرض التقدير الكمي لكل نوع من هذه المركبات .
وسنقوم هنا بأخذ مثال على كل طريقة من طرق الفصل الكروماتوجرافي الأكثر شيوعاً واستخداماً في المختبرات .

أولاً : فصل السكريات بطريقة الفصل اللوني الورقي :
وتتم هذه الطريقة بوجود مادة مذيبة على ورق خاص للفصل مثل أوراق الترشيح والتي تعتمد بدورها على وجود قوتين هما القوة الجاذبة الناتجة عن حركة المادة المذيبة خلال ورقة الفصل والقوة المعوقة الموجودة على ورقة الفصل .
المواد والأدوات اللازمة :
أوراق الفصل الكروماتوجرافي ( ورق ترشيح واتمان رقم 1 ) – محاليل سكرية 1% مثل الجلوكوز والسكروز والأرابينوز والفركتوز والجلاكتوز والرايبوز – محاليل مجهولة مثل رحيق الأزهار أو مستخلص نباتي أو عصير نباتي – المذيب مثل T-butanol : glacial acetic acid : water 3:1:1 أو فينول : ماء بنسبة 1:4 – محلول الإظهار P-anisidine spray reagent      ( يحضر وقت التجربة من 2 مل من حمض الفوسفوريك مع 50 مل من 95 % إيثانول ثم يضاف 0.5 جم من P-anisidine ثم يضاف حمض الهيدروكلوريك المركز ببطء حتى يصبح اللون أرجواني ) – أواني خاصة بالفصل – قلم ومسطرة .

خطوات العمل :
1-  يتم عمل خط بقلم الرصاص علة ورق الترشيح على بعد 5 سم من حافة الورقة ثم ضع إشارات × على مسافات متساوية بعدد المحاليل المجهولة والتي يراد فصل مكوناتها مع كتابة اسم كل محلول أسفل هذه الإشارة .
2-    ارفع طرف الورقة من جهة الخط باستخدام ساق زجاجية مثلاً بحيث لا تلامس أي سطح أثناء وضع العينات عليها .
3-  باستخدام ماصة ( ميكروبيبيت ) خذ 3 ميكروليتر من المحلول المجهول وضعه عند العلامة الخاصة به واتركها حتى تجف تماماً . كرر العملية عدة مرات لنفس المحلول مع وضع القطرات على نفس المكان .
4-    كرر الخطوة الثالثة لبقية المحاليل الموجودة لديك مع التأكد من وضع كل محلول على العلامة الخاصة به .
يمكن ثني الورقة على شكل اسطوانة ثم تدبيس أطرافها . بحيث يكون الخط المرسوم باتجاه الفتحة السفلى للأسطوانة .
5-  ضع المذيب في الوعاء الزجاجي على ارتفاع 3 سم من قاع الوعاء ثم ضع ورقة الفصل بحيث تكون الجهة المرسوم عندها الخط مغموسة في السائل المذيب .
6-  أغلق الوعاء واتركه لمدة  12 - 14 ساعة ثم أخرج الورقة وانزع الدبابيس عنها وعلم على المنطقة التي وصل إليها السائل .
7-  اترك الورقة حتى تجف تماماً ثم رش الورقة بالمحلول المظهر بواسطة مرش ثم ضع الورقة في فرن تجفيف عند 80 ْم لمدة 3 دقائق . ستظهر بقع ملونة دائرية الشكل تقريباً وبألوان مختلفة .
8-    يمكن حساب Rf  و Rrh للمركب كما يلي :
Rf = بعد مركز البقعة عن نقطة الأصل / بعد المذيب عن نقطة الأصل
Rrh = بعد مركز البقعة عن نقطة الأصل / بعد بقعة الرامينوزعن نقطة الأصل

التعرف على إنزيمات الأكسدة والإختزال


الأكسدة والإختزال عمليتان متضادتان ومتلازمتان أي أنه في حال حدوث عملية الأكسدة لمادة ما فإنه يحد اختزال لمادة أخرى في نفس الوقت .
وتحدث عملية الأكسدة لمادة ما إما بإضافة الأكسجين إليها أو بانتزاع الهيدروجين منها أو بفقدان الإلكترونات منها .
ومن هذه الإنزيمات المؤكسدة :
أ- الأكسيديزات Oxidases :
هذه المجموعة تساعد على أكسدة كثير من المواد الفينولية ويعزى إليها تغير لون أنسجة النبات عند تعرضها للهواء الجوي .
وتتم عملية الأكسدة بتنشيط أكسجين الهواء الجوي ليتحد مع هيدروجين المادة ويمثل هذه المجموعة إنزيم التيروزينيز .
طريقة العمل :
1-اصحن بعض قطع البطاطس في هاون خزفي جيداً لتكوين عجينة سائلة القوام . أضف بعض قطرات من محلول الجواياكم الكحولي 2% .
2-راقب لون محلول الجواياكم اللذي يزرق لونه عندما يتأكسد .
3-أعد نفس التجربة ولكن استعمل في هذه المرة عجينة من البطاطس التي سخنت لدرجة الغليان ثم بردت .
- نلاحظ في الفقرة الأولى أن لون الجواياكم يتحول من اللون البني إلى اللون الأزرق بسبب تأكسد الجواياكم بفعل إنزيمات الأكسيديزات ووجود أكسجين الهواء الجوي . أي تحول الجواياكم إلى كيتون ذو اللون الأزرق . أما في الخطوة الأخرى فلا يحدث تأكسد بفعل تكسر الإنزيمات بالتسخين .
 ب- التعرف على وجود البيروكسيديزات Peroxidases :
هذه المجموعة من الإنزيمات تستعمل الأكسجين  النشط الناتج من تحلل فوق الأكاسيد ومن هذه الإنزيمات المنتمية لهذه المجموعة إنزيم البيروكسيديز الموجود في جذور بعض النباتات مثل الفجل وخاصة ذو اللون الأبيض .
طريقة العمل :
1-حضر عجينة من جذور نبات الفجل وضعها في أنبوبتي اختبار ( أ ) و ( ب ) وأنبوبة ثالثة ( ج ) لايوضع فيها العجينة.
2-اغل الأنبوبة ( أ ) واترك الأنبوبتين ( ب ) و ( ج ) دون تسخين .
3-أضف إلى كل أنبوبة من الأنابيب الثلاثة 1 مل من محلول الجواياكم ثم بضع قطرات من محلول فوق أكسيد الهيدروجين ( ماء الأكسجين ) .
-يعمل هذا الإنزيم في وجود فوق أكسيد الهيدروجين الذي يتحلل إلى جزئ ماء وأيون أكسجين نشط .
ففي اأنبوب ( أ ) لايحدث تغير ( أكسدة ) للجواياكم بسبب تكسر الإنزيم بالتسخين أما الأنبوبة ( ب ) فيتغير لون المحلول فيها لحدوث عملية الأكسدة وذلك لتوفر جميع ظروف التفاعل . أما الأنبوبة ( ج ) فلا يحدث فيها تغير وذلك لعدم احتوائها على العجينة المشتملة على الإنزيم .
 ج- التعرف على وجود إنزيمات الكاتاليزات Catalases :
تعمل هذه الإنزيمات على تفكيك فوق أكسيد الهيدروجين الزائد عن استهلاك إنزيم البيروكسيديز فتفككه إلى ماء وجزئ أكسجين الذي يتصاعد . وهذ يمنع تراكم فوق أكسيد الهيدروجين على أنسجة النبات الذي يؤدي إلى تسممها.
طريقة العمل :
1-اصحن قليلاً من الخميرة مع رمل ناعم في هاون ثم أضف ماء مقطر مع الإستمرار بالطحن حتى تتكون عجينة ناعمة ثم رشح .
2-خذ قليلاً من الراشح في أنبوبتي اختبار ثم اغل أحداهما واترك الأخرى دون تسخين .
3-أضف إلى كل أنبوبة قليلاً من فوق أكسيد الهيدروجين .
- نلاحظ أن الأنبوبة التي تم تسخين محتوياتها لم ينتج فيا أي شيئ أما الأنبوبة الأخرى فنلاحظ تصاعد فقاعات منها وهو غاز الأكسجين والذي يمكن الكشف عنه بسد فوهة الأنبوبة ليتجمع قدر كاف من هذا الغاز وبتقريب عود ثقاب مشتعل فإنه يتوهج دلالة على وجود غاز الأكسجين .
 د- التعرف على وجود إنزيمات الدهيدروجينيزات Dehydrogenases :
تقوم هذه المجموعة بالأكسدة عن طريق نزع الهيدروجين من مركب ما ونقله إلى مركب آخر .
طريقة العمل :
1-احضر ثلاثة أنابيب ( أ ) و ( ب ) و ( ج ) واملأ كل أنبوبة لمنتصفها بحليب طازج غير مغلي .
2-اغل الحليب في الأنبوبة ( أ ) واترك الأنبوبتين الأخريين دون تسخين .
3-أضف إلى كل انبوبة بضع قطرات من محلول أزرق الميثيلين المخفف ثم رج محتويات الأنابيب بشكل جيد .
4-أضف للأنبوبتين ( أ ) و ( ب ) بضع قطرات من الأسيتالدهيد واترك الأنبوبة ( ج ) بدون إضافة .
5-ضع الأنابيب الثلاثة في حمام مائي عند 30 ْم لمدة 15 دقيقة .
-نلاحظ في النبوبة ( أ ) بقاء اللون الأزرق لأزرق الميثيلين لعدم حدوث أكسدة بسبب تكسر الإنزيم بالتسخين أما الأنبوبة ( ب ) فيختفي لون أزرق الميثيلين بفعل وجود الأكسجين الناتج من تحلل جزئ الماء بفعل إنزيم ديهيدروجنيز فيؤكسد هذا الأكسجين الأسيتالدهيد إلى حمض الفورميك وبالتالي يختزل أزرق الميثيلين فيؤدي إلى اختفاء لونه .  أما الأنبوبة ( ج ) فلا يحدث فيها نتيجة ويبقى لون أزرق الميثيلين كما هو لعدم وجود الأسيتالدهيد ( المادة المؤكسدة ) .

الكشف عن إنزيمات التخمر


مما هو معروف أن بعض الكائنات لديها إنزيم معقد وهو ( معقد الزيميز ) يوجد في خلايا فطر الخميرة وهو عبارة عن مجموعة من الإنزيمات تشترك على التعاقب في تحليل المادة الكربوهيدراتية المضافة والقابلة للتخمر وينتج عن هذه العملية غاز ثاني أكسيد الكربون والكحول أو حمض اللاكتيك ( حمض اللبن ) حسب نوع التخمر وظروفه .
طريقة العمل :
1-حضر محلول 10 % من سكر الجلوكوز ضع 25 مل منه في دورق ( أ ) ونفس الكمية في دورق ( ب ) , ثم أضف إلى الدورق ( أ ) قليلاً من معلق الخميرة في الماء واترك دورق ( ب ) دون إضافة .
2-غط كل دورق بسدادة تنفذ منها أنبوبة توصيل زجاجية ( يفضل استعمال أنبوبة شعرية ) ملتوية على شكل حرف U ويغمس طرفها الآخر في أنبوبة محتوية على محلول رائق من هيدروكسيد الباريوم .
3-ضع الدورق في حمام مائي عند 35 ْم ولاحظ ما يحدث لهيدروكسيد الباريوم.
- بعد فترة من الزمن نلاحظ أن هيدروكسيد الباريوم المتصل بالدورق ( أ ) يتعكر بفعل غاز ثاني أكسيد الكربون الناتج من تخمر ( تحلل ) سكر الجلوكوز بفعل إنزيمات التخمر . أما الأنبوبة ( ب ) لايحدث لمحلول هيدروكسيد الباريوم أي تغير .

تجربة إثبات وجود إنزيم الليبيز


المواد و الأدوات المستخدمة :
بذور الخروع – هاون خزفي – زيت بذرة الكتان – كحول إيثيلي 50 % - ورق تباع الشمس – محلول كبريتات النحاس –  محلول هيدروكسيد البوتاسيوم .
خطوات العمل :
 1-نحضر مستخلص به إنزيم الليبيز بأخذ بعض بذور الخروع المستنبتة ثم نقوم بنزع القشرة ونقطعها إلى أجزاء صغيرة ونصحنها في هاون حتى تتشكل لدينا عجينة تحتوي على إنزيم الليبيز .
2-امزج قليلاً من زيت بذرة الكتان مع حجم متماثل من الكحول الإيثيلي 50% , ونقوم باختبار هذا المزيج بورقة تباع الشمس فنجد أن هذا المزيج متعادل ولا يغير لون ورقة تباع الشمس .
3-أضف العجينة المحتوية على الإنزيم إلى مزيج الزيت الذي حضرناه مع الرج الشديد ثم نترك هذا المخلوط لمدة ثلاث ساعات تقريباً .
4-بعد هذه الفترة نقوم باختبار المزيج بورقة تباع الشمس الزرقاء فنجد أن اللون قد تغير إلى اللون الأحمر دلالة على أن المخلوط أصبح حمضياً بسبب تكون الأحماض الدهنية من عملية الهضم ( تحلل الدهن ) .
5-نقوم بالكشف عن وجود الجلسرول في الخليط كما يلي :
نأخذ قليلاً من المخلوط في أنبوبة اختبار ونضيف إليه قليلاً من محلول كبريتات النحاس وبضع نقاط من هيدروكسيد البوتاسيوم فإذا تكون لون أزرق غامق دل ذلك على وجود الجليسرول وهو أحد نواتج تحلل الدهون.

الكشف عن إنزيم الإنفرتيز ( السكريز )


الأدوات والمواد المستخدمة :
خميرة – هاون خزفي – ماء مقطر – سكر القصب  2 % ( السكر العادي السكروز ) – حمام مائي – محلول فهلنج أ و ب .
خطوات العمل :
1-خذ 3 جم من الخميرة الجافة واصحنها في هاون خزفي على شكل مسحوق ناعم جداً .
2-امزج هذا المسحوق مع 50 مل من الماء المقطر واترك الخليط لمدة 30 دقيقة ثم رشح ( الراشح يحتوي على إنزيم الإنفرتيز ( السكريز ) ) .
4-حضر محلول سكر القصب بتركيز 2 % .
5-خذ حوالي 5 مل من مستخلص الإنزيم في كل من أنبوبتي اختبار ( أ , ب ) واغل المستخلص في الأنبوبة ( أ ) ثم برده واترك الميتخلص في الأنبوبة ( ب ) دون تسخين .
6-أضف 5 مل من محلول السكروز إلى كلا الأنبوبتين وضع الأنبوبتين في حمام مائي عند 30 ْم . واترك المحلول في الأنبوبتين لمدة نصف ساعة .
 7-خذ 3 مل من كل أنبوبة واكشف عن وجود سكريات مختزلة ( سكر الجلوكوز ) باستخدام محلول فهلنج كما سبق .
-نلاحظ أن الأنبوبة ( أ ) لم يحدث فيها تكون اللون الأحمر الطوبي أي عدم وجود سكر الجلوكوز وذلك بسبب تكسر الإنزيم بفعل التسخين أما الأنبوبة ( ب ) فيتغير اللون فيها إلى اللون الأحمر الطوبي دلالة على وجود الجلوكوز .

استخلاص الإنزيمات المحللة ومنها إنزيم الدياستيز ( الأمليز ).


الإنـزيـمات النبـاتـية
الإنزيمات هي مواد عضوية ذات طبيعة بروتينية تنتجها الخلايا الحية وتتخصص هذه الإنزيمات في اتمام تفاعلات كيموحيوية مختلفة .
ولهذه الإنزيمات عدة أنواع بحسب تخصصها في المواد التي تؤثر فيها , فمنها الإنزيمات الهاضمة ومنها إنزيمات التخمر , ومنها الأكسدة والإختزال .
وسوف نقوم ببعض التجارب لاستخلاص بعض إنزيمات النبات والتعرف على بعض التأثيات التي تحدثها على المواد .
الهدف من التجربة :
استخلاص الإنزيمات المحللة ومنها إنزيم الدياستيز ( الأمليز ).
الأدوات والمواد اللازمة :
حبوب قمح – هاون خزفي – ورق ترشيح – محلول اليود – طبق ذو فجوات – محلول فهلنج أ و ب – أنابيب اختبار .
طريقة العمل :
1-استنبت حبوب القمح ثم اصحن كمية من هذه الحبوب في هاون خزفي مع قليل من الرمل النظيف ثم أضف إليها أربعة أمثال حجمها ماء مقطر .
2-اترك هذا الخليط لمدة ساعتين في الثلاجة ثم رشح ( يكون الخليط في هذه الحالة غني بالإنزيمات ومنها إنزيم الدياستيز الأكثر نشاطاً ) .
3-انقل 5 مل من مستخلص الإنزيم المحضر إلى كل من أنبوبتي اختبار وسخن المحلول في أحدى الأنبوبتين ( أ ) إلى درجة الغليان ثم برده .
واترك المحلول في الأنبوبة الأخرى ( ب ) دون تسخين .
4-خذ كمية قليلة من محتويات كل أنبوبة وأضف إليها حجماً مماثلاً من محلول النشا 1 % مع الرج حتى تمتزج المحاليل جيداً ثم ضع الأنبوبتين في حمام مائي عند 30 ْم .
5-خذ كمية بسيطة ( قطرات ) من المحلول في كل أنبوبة باستخدام قطارة نظيقة ( كل دقيقتين  ) وضعها في فجوة من فجوات الطبق ذو الفجوات المتعددة ( يمكن استخدام طبق الرسم ) وأضف للقطرات قطرة أو اثنتين من محلول اليود .
6-كرر العملية السابقة كل دقيقتين و لاحظ التغير في اللون في كلا الأنبوبتين ( أ ) و ( ب ) مع مرور الزمن نتيجة إضافة اليود لهما .
7-بعد مرور نصف ساعة من بدء التجربة خذ 3 مل من كل أنبوبة مع 3 مل من محلول فهلنج أ و ب للكشف عن السكريات المختزلة ( سكر الجلوكوز ) .
-بالنسبة للأنبوبة ( أ ) التي قمنا بغليها ثم أضفنا النشا إليها نلاحظ أن لون المحلول يبقى  دون تغير ( يبقى أزرق قاتم ) عند إضافة اليود إليه وذلك بسبب تكسر الإنزيم بفعل التسخين .
أما بالنسبة للأنبوبة ( ب ) والذي لم يتعرض المحلول فيه إلى معاملة حرارية فيتغير لون المحلول المضاف إليه اليود بمرور الوقت  من اللون الأزرق القاتم إلى لون أفتح بالتدريج مع مرور الوقت حتى يختفي اللون وذلك دلالة على حدوث الهضم للنشا بفعل إنزيم الدياستيز ( الأمليز ) وتحوله إلى سكر أحادي هو الجلوكوز .
 وللتأكد من وجود سكر الجلوكوز نقوم بالكشف عنه بإضافة 3 مل من الأنبوبة ( ب ) إلى 3 مل من محلول فهلنج أ و ب وبالتسخين يتحول لون المحلول إلى اللون الأحمر الطوبي دلالة على وجود سكر الجلوكوز في الأنبوبة ب . أما بالنسبة للأنبوبة ( أ ) فلا يتغي اللون إلى الأحمر الطوبي مع التسخين لعدم وجود سكر الجلوكوز . 


التداخل بين الهرمونات النباتية Interaction of plant hormons


أوضحت التجارب التداخل في فعل الهرمونات النباتية وأن هذه الهرمونات لا يعمل أحدها بمعزل عن الآخر ولكن تتحد هذه الهرمونات في تأثيرها على النمو والعمليات الفسيولوجية في النبات وأن بعض هذه الهرمونات تتأثر بوجود هرمون آخر بحيث لو أنه تم فقد هذا الهرمون فإن الهرمون الآخر لا يعمل بشكل صحيح وكمثال على ذلك اعتماد الجبريلين على الوكسين في إتمام وظيفته وهي زيادة النمو في الساق واستطالته .
وسنقوم هنا بإذن الله دراسة تأثير أندول حمض الخل IAA وحمض الجبريليك والكاينتين على نمو قطاعات من نبات البازيلاء .
المواد والأدوات اللازمة .
بادرات بازيلاء بعمر 10 أيام منماة في الضوء خمسة أصص – محاليل من الكاينتين , حمض الجريليك , اندول حمض الخل بتركيز 0.1 مليمول  – ماصات – أنابيب اختبار حجم 50 ملل – شفرات – مسطرة – محلول توين 20 ( تركيز 6 نقط / ل ) .
خطوات العمل :
1-   قس طول كل نبات من النباتات الموجودة في الأصص .
2-   رش النبات الموجود في الإصيص رقم 1 بالماء المقطر المحتوي على توين 20 بعيداً عن النباتات الأخرى .
3-   رش النبات الموجود في الإصيص رقم 2 بمحلول حمض الجبريليك .
4-   رش النبات الموجود في الإصيص رقم 3 بمحلول اندول حمض الخل .
5-   رش النبات الموجود في الإصيص رقم 4 بمحلول الكاينتين .
6-   رش النبات الموجود في الإصيص رقم 5 بخليط من المحاليل الهرمونية السابقة بالتساوي .
7- ضع النباتات في مكان مناسب للنمو لمدة أسبوع ثم قس أطوالها بعد انتهاء الفترة وقارن بين النباتات من حيث أفضل قدر من النمو .